一、试剂盒组成、储存、稳定性 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及 时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2． Buffer FP1、Buffer P3 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分钟帮 助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 3． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 二、原理简介 针对多糖、多酚的去除成份，迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，不需 要氯仿抽提，彻底清除多糖、多酚和蛋白质，基因组 DNA 在高离序盐状态下 选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心步骤, 进 试剂盒组成 保存 50 次 （DP10011） 100 次 （DP10012） 200 次 （DP10013） Buffer FP1 室温 30 ml 60 ml 120 ml Buffer P2 室温 7 ml 14 ml 28 ml Buffer P3 室温 50 ml 100 ml 200 ml RNase A -20℃ 200 μl 400 μl 800 μl 漂洗液 WB 室温 15 ml 25ml 25mlX2 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液 EB 室温 15 ml 20 ml 40 ml 分离柱 A 室温 50 个 100 个 200 个 吸附柱 AC 室温 50 个 100 个 200 个 收集管（2ml） 室温 50 个 100 个 200 个  一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液 将基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。 三、试剂盒特点 1． 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2． 不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂。 3． 快速，简捷，单个样品操作一般可在 1 小时内完成。 4． 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型 的比值达 1.7～1.9，长度可达 30Kb-50kb，可直接用于 PCR， Southern-blot 和各种酶切反应。 四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1． 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm的 传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2． 开始实验前将需要水浴的物品先预热到 65℃备用。 3． Buffer P3 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染 皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理 盐水冲洗。 4． 不同来源的植物组织材料中提取的DNA 的量会有差异，一般100mg 新鲜组织典型产量可达3-25μg。 5． 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。 也可以使用水洗脱， 但应该确保 PH 大于 7.5, PH 过低影响洗脱效 率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存，可 以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，PH 8.0），但 是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 五、操作步骤 * 第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇! * 将 Buffer P1 放置在 65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度 0.2%。 1． 加热 Buffer FP1 到 65℃预热灭菌去离子水。 2． 取适量样本在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。 3． 转移细粉（植物新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg）到一个 1.5ml 离心管，不要解冻，加入 550μl 65℃预热 Buffer FP1 和 4μlRNase A 剧烈涡旋振荡混匀 1 分钟，65℃水浴 30 分钟.期间激烈涡旋震荡 3 次。 4． 加入 130μl 的 Buffer P2,充分混匀，12000rpm 离心 3 分钟。 5． 小心吸取上清到一个分离柱 A，注意不要吸到界面物质，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集下液。 6． 加入 1.5 倍体积的 Buffer P3 立刻轻柔涡旋，充分混匀。 7． 将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱 AC 中， （吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的 废液。 8． 加入 700μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 1 分钟，弃掉废液。 9． 加入 500μl 漂洗液 WB，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃掉废液。 10．将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 3-5 分钟，尽量除 去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 11．取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热）， 室 温放置 3-5 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟收集 DNA。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，可以 50μl 分两次洗脱，可以提高洗脱效率。 12．DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。 六、疑难解答（Trouble shooting） 出现的问题 可能的原因 建议解决方法 DNA产量低 处理材料过量或者裂解不 完全 使用适量的起始材料，充分研磨 或者匀浆 RNA 残留 植物含量 RNA 太丰富 在 步 骤 3 后 裂 解 物 中 加 40μl RNase ， 也 可 以 多 加 到 80μl RNase。 未提取到 DNA 漂洗液 WB 中忘记加无水 乙醇 第一次实验时，在漂洗液 WB 中 加入指定量无水乙醇。 洗脱下来的 DNA 溶 液带颜色或者膜上 有明显的色素残留 漂洗次数不够 步骤 7 完成后，加 500μlWB 或 无水乙醇再漂洗一遍 起始材料太多过量 减少起始处理材料，不要过量 洗脱下来的DNA产量 低 离心柱残留有较多乙醇或 者底部不慎重沾有乙醇 确保做了步骤 10，否则残留乙醇 会影响洗脱效率。 使用了水或者其它非最佳 液体代替洗脱缓冲液 仔细阅读步骤 10 和只使用洗脱缓 冲液 EB 洗脱。 A260吸光值异常偏高 一些硅基质膜成分一起洗 脱下来，干扰了吸光值 将洗脱的基因组 DNA 溶液 13， 000rpm 再离心一分钟，小心取上 清使用。 DNA下游酶切不能 切开或者酶切不完 全 一些硅基质膜成分一起洗 脱下来，抑制了酶切反应 将洗脱的基因组 DNA 溶液 13， 000rpm 再离心一分钟，小心取上 清使用。 离心柱残留有较多乙醇或 者底部不慎沾有乙醇抑制 了酶切反应 确保做了步骤 10，然后空气中晾 几分钟，让残留乙醇挥发。