一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次 （DP5301） 缓冲液 VB 室温 5 ml 病毒结合液 室温 30 ml 蛋白酶 K（20mg/ml） -20℃ 20mg Carrier RNA 室温 300ul 去蛋白液 RE 室温 30 ml 漂洗液 RW 4℃（一个月） -20℃（长期） 15 ml 第一次使用前请加入指定量乙醇 Wash buffer 室温 10 ml 微量吸附柱 RA 室温 50 个 收集管（2ml） 室温 50 个 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指定量乙醇(15ml RW 瓶加 60ml)，充分混匀， 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2． 为避免降低活性，方便运输，提供 20mg 蛋白酶 K 为冻干粉状，使用时可短暂离心 后，加入 1 毫升灭菌水溶解(20mg/ml 终浓度)。因为反复冻融可能会降低酶活性， 因此溶解后立即按照每次使用量(20 微升)分装冻存，-20℃保存。 3． 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 二、原理简介 独特的结合液/蛋白酶 K 迅速裂解病毒和灭活病毒内核酸酶，然后基因组 DNA 和 RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系 列快速的漂洗－离心的步骤, 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等 杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 和 RNA 从硅基质膜上洗 脱。 三、试剂盒特点 1． 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2． 快速，简捷，单个样品操作一般可在 30 分钟内完成。 3． 多次柱漂洗确保高纯度,无抑制性杂质。 4． 本试剂盒用于从新鲜或者冷冻的血浆、血清、全血和其它无细胞体 液等样品中提取病毒基因组 DNA 和 RNA,冷冻样品不要反复冻融。所 得样品可以直接用于 PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。 四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1． 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm的 传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2． 开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。 3． 为了最佳效果，最好使用新鲜液体标本并且避免反复冻融，否则会 使提取片段较小并严重降低产量。 五、操作步骤 * 第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指定量无水乙醇! 1. 取 200μl 含病毒的液体（血清、血浆、全血等），放入 1.5ml 离心管。 对如果液体起始量小于200μl，则用缓冲液VB补足到200μl。如果起始量介于 200μl-300μl之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。对于组织样本 应当先研磨，然后用200ul的缓冲液VB重悬，然后在加到病毒裂解液中。 2. 加入600μl 的病毒结合液，加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液，6ul的 核酸助沉剂，振荡15秒，充分混匀，65℃水浴15分钟，期间颠倒混 匀3-4次，直到溶液应清亮为止。 3. 加入100μl 无水乙醇，上下颠倒，充分混匀，此时可能会出现絮状 沉淀。 上述各操作步骤中适当力度充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量。 4. 将上一步所得溶液和可能的絮状沉淀分两次加入一个吸附柱RA中， （吸附柱放入收集管中）10,000 rpm离心30秒，倒掉收集管中的废 液。 5. 加入600μl去蛋白液RE，12,000 rpm 离心30秒，弃废液。 6. 加入 700μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。 7. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去 漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 8. 取出吸附柱 RA，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 30-50μl Wash buffer（Wash buffer 事先在 65-70℃水浴中预热）， 室温放置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。将得到的溶液重新加入 离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。 9. DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。RNA 最好直接反转录成 CDNA 保存，或者 RNA 保存于-80°C。