一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次 （DP4021） 100 次 （DP4022） 200 次 （DP4023） 抽提液 室温 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K（溶液 A） -20℃ 20 mg 20 mg×2 20 mg×4 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室温 10 ml 20 ml 40 ml 蛋白沉淀液 室温 30 ml 60 ml 120 ml 溶液 C 4℃(一个月） -20℃(长期) 25 ml 50 ml 100 ml 溶液 D 室温 5 ml 10 ml 20 ml 结合液 DB 室温 25 ml 50 ml 100 ml 去蛋白液 PE 室温 25 ml 50 ml 100 ml 漂洗液 WB 室温 15 ml 25ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液 EB 室温 5 ml 10 ml 20 ml 纯化柱 室温 50 套 100 套 200 套 吸附柱 AC 室温 50 套 100 套 200 套 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 溶液 B 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 65℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢 复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 二、原理简介 独特的抽提和裂解体系迅速裂解细胞（壁）和灭活细胞内核酸酶，不需 要借助玻璃珠破壁，有效保证了基因组 DNA 的完整性，经过特殊处理的纯化 柱能有效的去除杂质和腐殖酸，极大的提高了 DNA 的纯度，用本试剂盒快速 简便（1 小时内）提取基因组 DNA 纯度极高，适合做 PCR 等下游反应。 三、试剂盒特点 1． 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 2． 兼容性强，适用于各种不同的淤泥、粪便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 4． 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 5． 高纯度，OD260/OD280典型的比值达 1.7～1.9，长度可达 50kb 以上， 可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。 四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1． 所有的离心步骤均可在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm 的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 溶液 B 低温容易形成沉淀，可在 65℃水浴帮助溶解。 2． 请自备 70%乙醇 3．样品必须是新鲜采样或保存于-80℃，样品不能常温保存时间过长。 【百泰克生物】定货热线：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com 【百泰克生物】定货热线：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com -5- －2－ 五、操作步骤 a．准确称量 0.1--0.3g 的新鲜样品到干净的离心管中，加入 1ml 的抽提液，加 入 10ul 的蛋白酶 K 和 50ul 的溶菌酶，Vortex 2-3 分钟，至到颠倒混匀离心管 时，土样不会聚在管底或轻弹即可散开，充分混匀后 37℃水浴 20 分钟（水浴时， 每隔 1-2 分钟震荡混匀，使土样均匀散开，不聚在管底为好）。 b．加入 200ul 溶液 B，Vortex 2-3 分钟，充分混匀后 65℃水浴 10 分钟（水浴 时，每隔 1-2 分钟震荡混匀，使土样均匀散开，不聚在管底为好）。 c．13000rpm 离心 10 分钟取上清至新的 1.5ml 离心管。 d. 加入 1/2 体积的蛋白沉淀液，充分颠倒混匀。 e. 冰浴 8 分钟，13000rpm 离心 10 分钟取上清。 f.在上清液加入 500ul 的溶液 C，充分颠倒混匀。 g.将步骤 f 得到的混合液加入到纯化柱中, 10000rpm 离心 1 分钟过滤,收集下滤 液（下滤液含有 DNA）。混合液体积大，应该分两次过滤。 h. 准确估计下滤液的体积，加入 0.6 倍体积的异丙醇，充分混匀，13000 rpm 离心 10 分钟，小心倒掉上层悬液，沉淀倒扣吸水纸 2 分钟。 i.用 100ul 溶液 D 充分溶解沉淀，加入 5 倍体积的结合液 DB，上下颠倒混匀， 将混合液倒入吸附柱中，静置 1 分钟，13000rpm 离心 1 分钟，弃下液。 j.在吸附柱中加入 500ul 的去蛋白液 PE，13000rpm 离心 1 分钟，弃下液。 k. 在吸附柱中加入 700ul 的漂洗液 WB，13000rpm 离心 1 分钟，弃下液。在吸 附柱中加入 500ul 的漂洗液 WB，13000rpm 离心 1 分钟，弃下液。将吸附柱重新 放回套管中，13000rpm 离心 3-4 分钟。 l.将吸附柱转移至新的 1.5ml 离心管中，在吸附柱的中间加入 30-50ul 的洗脱 缓冲液 EB，13000rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA，可立即用于下游分子生物学实验或 -20℃保存。