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一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 1 缓冲液 BB 2 洗脱缓冲液 TE 3 磁珠结合液 CB 4 磁珠 5 抑制物去除剂 IR1 6 抑制物去除剂 IR2 7 漂洗液 WB 8 蛋白酶 K 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 本试剂盒中 1-6 号试剂已经分装在 96 孔深孔板中,蛋白酶 K 使用前可先 短暂离心,加入 1mL 去离子水充分溶解后使用。 二、操作步骤 1、小心撕开 96 孔深孔板的塑封膜,注意保持深孔板的平稳。 2、在深空板的第 1 列和第 7 列分别加入 200uL 样本(全血、凝固血团块、全 血离心沉淀物、白细胞),加入 20uL 蛋白酶 K(20mg/ml)。 3、将深孔板平稳放入自动核酸提取仪,然后将搅拌套插入到卡槽中。 4、设置核酸提取仪的程序,具体如下,“温度设置”时,裂解温度设为 80℃, 洗脱温度设为 65℃,然后点击“运行”开始实验。 步 骤 孔 位 名称 等待时 间 (min) 混合时 间 (min) 磁吸时 间(s) 混合 速度 容积 运行 状态 1 2 2 1 转移磁珠 裂解吸附 0 0 1 20 30 60 慢 慢 300 600 否 否 3 3 漂洗 0 5 30 中 400 否 4 4 漂洗 0 4 30 中 400 否 5 5 漂洗 0 3 30 中 400 否 6 6 洗脱 2 15 60 中 200 否 7 2 弃磁珠 0 0 0 慢 0 否 5、实验结束后,小心取出搅拌套和深孔板,将深孔板的第 6 列和第 12 列中 的核酸溶液转移至 EP 管。(若有少量磁珠残留,可离心去除,少量磁珠不 影响 PCR) 附一: 深孔板手工加试剂步骤 1、7 列 350μ L 磁珠结合液 CB + 121ul 异丙醇 + 20ul 蛋白酶 K 2、8 列 300μ L 缓冲液 BB 3、9 列 900μ L 抑制物去除剂 IR1 4、10 列 900μ L 抑制物去除剂 IR2 5、11 列 900μ L 漂洗液 WB 6、12 列 120-200μ L 洗脱液 TE