1.取pBait-AbAi质粒5µg，BstBI或BbsI酶切1小时，回收。

2.取100 μl冰上融化的Y1HGold感受态细胞，依次加入预冷的线性pBait-AbAi质粒1-5 µg（体积不高于15 µl），Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3.将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH₂O 400 µl重悬，离心30s弃上清。

4. ddH₂O 50 µl重悬，涂SD/-Ura平板，29℃培养72 h。

5.挑取5-10个克隆，用PCR方法确定pBait-AbAi整合到Y1HGold基因组中，PCR阳性菌株在SD/-Ura平板划线，29℃培养72 h，4℃保存，此菌株即是Y1HGold[Bait/AbAi]菌株。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. Y1HGold酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。