---

产品规格
MSU440 Electro： 10×50μl
pCAMBIA2301（control vector) 10ng/μl 10μl
保存条件： -80℃

基因型

Agrobacterium rhizogenes(str^R) MSU440 Ri (agropine type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染

大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，

具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，茶树，青蒿等），同时具有链霉素抗性。唯地生物开发的MSU440发

根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>10⁵

cfu/μgDNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kd）检测转化效率可达5×10³cfu/μg DNA。

常规操作方法

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充

分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟

充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好

用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移

到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用

电转仪推荐的protocol操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动电击，

电击完成快速插入冰中，加入1 ml无抗生素的TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放

于28℃培养箱培养2-3天

●农杆菌相关抗生素配方：

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素(carb)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
硫酸卡那霉素(kan)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
链霉素(strep)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	50 μg/ml
利福平(rif)	DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	20 μg/ml
庆大霉素(gent)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	20 mg/ml	40 μg/ml
氯霉素（cam）	无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	34 mg/ml	34 ug/ml

常用农杆菌抗性：(R：抗；S：敏感。)

农杆菌菌株	羧苄青霉素(carb)	链霉素(strep)	利福平(rif)	氯霉素(gent)	硫酸卡那霉素(kan)
Ar A4	S	S	S	S	R
MSU440	S	R	S	S	S
Ar Qual	S	R	S	R	S

● TY配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeast extract 3g

补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧

下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，

应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。

4. MSU440具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。