用于转化的 DNA 应纯化，并重悬于水中或 TE 缓冲液里；

加入 DNA 体积不超过感受态细胞体积的 1/10 ；

对于纯化超螺旋 pUC19 ， 100 pg~1 ng 的用量时转化效率最高，但加大 DNA 用量可提高总克隆数；

细胞最好在冰上解冻，

管中的最后一点冰融化后，立即加入 DNA ；

温度高于 0°C 时，转化效率就开始下降；

加入 DNA 后冰育 30 分钟。预计每缩短 10 分钟，转化效率会有 2 倍左右的损失；

热激的温度和时间取决于转化体积和离心管壁的厚度，通常为 42 ℃ 孵育 30~90 秒；

热激后在 37°C 复苏 1 小时转化效率最佳。预计每缩短 15 分钟，转化效率会有 2 倍左右的损失；